【答案】  防止外来杂菌入侵  将聚集的菌种逐步减少以获得单个菌落  接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始  碳源  稀释涂布平板  检测培养基平板灭菌是否合格

【解析】试题分析：本题考查微生物培养分离以及微生物的选择方面的相关知识，要求学生明确微生物的培养和微生物选择的方法，属于考纲识记和理解层次的考查，这类试题需要学生在平时的学习过程中学会构建知识网络结构。根据题干信息“常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖”，则在以木糖为唯一碳源的培养基中酵母菌会死亡，“自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精”说明这些酵母菌含有与木糖发酵有关的酶的基因。可以通过相应的选择培养基筛选、分离此类微生物。

（1）在微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。

（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做可以将聚集的菌落逐步减少以获得单个菌落。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始。

（3）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一碳源的固体培养基上，在适宜的条件下培养一段时间，获得能利用木糖的多个酵母菌菌落。实验中所用培养基按功能属于选择培养基。

（4）若要检测土样中的酵母菌含量，应采用稀释涂布平板法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，用于检测培养基平板灭菌是否合格，如果空白平板上出现了菌落，说明平板灭菌不合格。