【答案】D
【解析】解：进行接种时应注意：
①接种室要消毒，①正确；
②实验过程要无菌操作，②正确；
③接种时不可以谈话，防止杂菌污染，③错误；
④外植体可先用体积分数为70%的酒精消毒，取出用无菌水冲洗后，再用0.1%的氯化汞溶液消毒，并用无菌水冲洗干净，④错误；
⑤接种操作要在酒精灯火焰旁进行，防止交叉污染，⑤正确；
⑥接种完毕后立即盖好瓶盖，⑥正确．
故选：D．